Tối ưu hoá điều kiện PCR trong khuếch đại đoạn Intron 2 của gen leptin và vùng 5’Utr của gen thyroglobulin trên DNA tách chiết từ gốc lông bò

Tóm tắt

Đoạn intron 2 của gen leptin (LEP) và vùng 5’ không dịch mã (5’ UTR) của gen thyroglobulin (TG5) được xem là gen dự tuyển để chọn lọc các tính trạng liên quan đến năng suất và chất lượng thịt bò. Nghiên cứu này được thực hiện nhằm tối ưu hoá các điều kiện PCR trong việc phát hiện khuếch đại đoạn gen LEP và TG5. Các mẫu gốc lông bò được sử dụng để tách chiết DNA tổng số bằng AccuRive sDNA/RNA Prep kit của KT Biotech. Trong 20µl thể tích phản ứng có chứa 1,25 µM mồi; 200mM dNTP; 1× PCR buffer; 0,75 đơn vị Taq polymerase và DNA tổng số. PCR được tối ưu với việc xác định nhiệt độ gắn mồi và nồng độ DNA khuôn mẫu. Nồng độ DNA khuôn mẫu được thăm dò trong khoảng 25-150 ng. Khoảng nhiệt độ gắn mồi được khảo sát là 55-64°C đối với cặp mồi LEPF/LEPR và 52-58°C đối với cặp mồi TGF/TGR. Kết quả cho thấy khoảng nhiệt độ gắn mồi phù hợp để khuếch đại gen LEP bằng cặp mồi LEPF/LEPR là 58-62°C, tối ưu ở 62°C. Trong khi đó, nhiệt độ gắn mồi cho sản phẩm khuếch đại đặc hiệu khi sử dụng cặp mồi TGF/TGR trong khoảng 52-58^oC, tối ưu ở 55°C. Nồng độ DNA tổng số phù hợp cho khuếch đại hai gen nói trên là 50-75 ng khi sử dụng nồng độ mồi mỗi loại là 1,25 µM. Trong trường hợp cần sử dụng kỹ thuật multiplex PCR để khuếch đại đồng thời 2 gen LEP và TG5, có thể tiến hành gắn mồi ở nhiệt độ 58^oC.